大型層析柱是凝膠層析技術中的主體，一般用玻璃管或有機玻璃管。層析柱的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，直徑大于2厘米，但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。此外， 直徑加大，洗脫液體體積增大，樣品稀釋度大。分離度取決于柱高，為分離不同組分，凝膠柱床必須有適宜的高度，分離度與柱高的平方根相關。
大型層析柱 以中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素為例
中壓分離層析柱操縱方法
以中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素為例
1 吸附劑的處理及柱子裝填
將一定量薄層層析硅膠裝人搪瓷盤置于烘箱中，取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充，填滿整個柱體，不留死體積，密封后用柱塞式計量溶劑泵按丙酮一石油醚比例泵人溶劑，至溶劑流出止。
2 上樣
3 洗脫
至洗脫完全，相同流份合并，回收溶劑。將冬凌草甲素流份合并蒸干。加人適量甲醇熱溶后自然放置，析出結晶，為冬凌草甲素。
4 層析柱再生、平衡
5 重結晶
冬凌草甲素結晶析出完全后，減壓過濾，然后用少量甲醇洗滌(洗滌液保存，作下次熱溶冬凌草甲素用)。將冬凌草甲素再用適量甲醇熱溶后放置，結晶再次析出，待結晶完全后，抽濾，用少量乙醚洗滌，將結晶室溫下晾干后置真空干燥箱中，真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。
6 薄層層析分析
表明在該展開系統下，冬凌草甲素樣品和對照品都具有相同的RF值，并呈現出同樣的藍綠色斑點，在制備的冬凌草甲素樣品中，沒有雜質斑痕。大型層析柱
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